TRPC6高表达对血管紧张素Ⅱ诱导的小鼠足细胞凋亡的影响

摘要

目的观察瞬间受体电位阳离子通道蛋白6（TRPC6）高表达对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的小鼠足细胞凋亡的影响并探讨其作用机制。方法用脂质体将针对小鼠TRPC6的基因真核表达载体pEGFP-N1-mTRPC6转染体外培养的永生化小鼠足细胞系。24 h后用荧光显微镜观察增强绿色荧光蛋白（EGFP）的表达。Western印迹法检测转染后TRPC6蛋白表达的变化。将足细胞分组。应用不同浓度AngⅡ处理足细胞,Fluo-3AM结合激光共聚焦显微镜检测各组足细胞胞质内钙离子的浓度。RT-PCR及Western印迹法检测Bax、Bcl-2 mRNA及蛋白的水平。流式细胞仪及Hoechst染色法检测足细胞凋亡。结果pEGFP-N1-mTRPC6转染足细胞后,约35%细胞出现绿色荧光;足细胞TRPC6蛋白表达明显上调（P＜0.01）。TRPC6高表达可以明显促进AngⅡ诱导的足细胞钙离子内流（P＜0.01）,在蛋白及基因水平均上调Bax的表达而下调Bcl-2的表达（P＜0.01,P＜0.05）。在低剂量AngⅡ(10-10 mol/L)作用下,足细胞凋亡率为（2.50±0.72）%,转染TRPC6以后凋亡率为（4.33±0.45）%,差异有统计学意义（P＜0.05）。在高剂量AngⅡ(10-6 mol/L)作用下,足细胞凋亡率为（15.46±1.40）%,转染TRPC6以后凋亡率为（18.33±0.87）%,差异有统计学意义（P＜0.01）。结论TRPC6在AngⅡ诱导的足细胞凋亡中发挥重要作用。TRPC6可能通过增加钙离子内流,进而启动其下游的凋亡调节成分参与凋亡过程。