WNK3激酶对肾脏大电导钙激活钾通道的调节作用及机制

摘要

目的探讨WNK3激酶对肾脏大电导钙激活钾通道（Maxi K通道）的调节作用及其机制。方法（1）在非洲绿猴肾成纤维细胞（Cos-7细胞）中转染0.5μgMaxi K质粒的同时分别转染0、0.6、1.2、1.8μgWNK3质粒,Western印迹检测细胞总蛋白中Maxi K通道的表达及丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）的磷酸化水平。（2）Cos-7细胞分为转染2.5μg Maxi K质粒组（对照组）和转染2.5μg Maxi K质粒+2.5μgWNK3质粒组（实验组）,细胞表面生物素化方法检测细胞表面膜蛋白中Maxi K通道的表达,免疫沉淀和Western印迹检测Maxi K通道蛋白泛素化水平。（3）用WNK3 siRNA沉默WNK3激酶基因,用质子泵抑制剂（Baf-A1）阻断溶酶体降解途径,Cos-7细胞分为Maxi K+阴性对照siRNA组、Maxi K+WNK3 siRNA组和Maxi K+WNK3 siRNA+Baf-A1组。Western印迹检测细胞中Maxi K通道蛋白的表达。结果（1）与0μg WNK3质粒组比较,转染0.6、1.2、1.8μg WNK3质粒组细胞总蛋白中Maxi K通道的表达均升高,MAPKERK1/2的磷酸化水平均降低（均P＜0.01）,且呈剂量依赖性。（2）与对照组比较,同时转染WNK3和Maxi K的实验组细胞总蛋白和膜蛋白中Maxi K通道的表达均增加,Maxi K通道蛋白的泛素化水平降低（均P＜0.01）。（3）与Maxi K+阴性对照siRNA组比较,Maxi K+WNK3 siRNA组Maxi K蛋白表达降低（P ＜0.01）, Maxi K+WNK3 siRNA+Baf-A1组的Maxi K蛋白表达无明显变化（P＞ 0.05）;与Maxi K+WNK3 siRNA组比较,Maxi K+WNK3 siRNA+Baf-A1组的Maxi K蛋白表达升高（P＜0.01）。结论WNK3激酶通过减少Maxi K通道蛋白的泛素化来抑制Maxi K通道的溶酶体降解途径,从而促进Maxi K通道在细胞内和细胞膜上的表达量。其机制可能与MAPK ERK1/2转导通路有关。