咪达唑仑对氧葡萄糖剥夺后N2a/APP695细胞β淀粉样蛋白的抑制作用及机制

摘要

目的 探讨咪达唑仑对被剥夺氧和葡萄糖(oxygen-glucose deprivation,OGD)后的N2a/APP695细胞淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)代谢变化的影响及机制.方法 将处于对数生长期的N2a/APP695细胞用平衡盐缓冲液冲洗后随机分为空白组、对照组及实验组.空白组未经OGD处理,在正常培养箱内培养;对照组行OGD处理后继续培养复氧;实验组在OGD处理后加入不同浓度(分别为70、100、125、150 ng/ml)的咪达唑仑继续培养复氧.24 h后用AnnexinVFITC/双染法流式细胞术检测各组细胞凋亡比例;用Western blot方法检测各组细胞的Caspase-3、Aβ1-42、解整合素金属蛋白酶10(adisintegrin and metalloproteinase 10,ADAM10)、β-淀粉样前体蛋白水解酶1(β-site APP cleavage enzyme-1,BACE1)、早老素1(presenilin 1,PS1)蛋白水平.结果 与空白组相比,对照组的细胞凋亡比例、Caspase-3、Aβ1-42、BACE1及PS1水平显著升高(P＜0.05);APP及ADAM10水平无明显变化(P＞0.05).与对照组相比,实验组细胞凋亡比例、Caspase-3、Aβ1-42显著下降(P＜0.05);咪达唑仑70 ng/ml组BACE1显著下降(JP＜0.05),而APP、ADAM10及PS1无明显变化(P＞0.05).结论 OGD可通过上调BACE1及PS-1导致Aβ1-42表达增加促使细胞凋亡;而咪达唑仑可通过下调BACE1减少Aβ1-42表达进而减少神经细胞凋亡,发挥对OGD损伤后N2a/APP695细胞的保护作用.