Rasal2在肺动脉平滑肌细胞增殖及迁移中的作用机制

摘要

目的探讨Ras蛋白激活类似物2(Rasal2)调控肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖与迁移的作用机制。方法提取慢性-低氧小鼠肺动脉组织以及使用低氧条件刺激PASMCs,检测Rasal2表达变化。体外沉默Rasal2后检测各组哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合体1(mTORC1)下游效应分子S6、4EBP1的蛋白磷酸化变化,Ki-67免疫荧光染色与Transwell分析检测各组细胞增殖与迁移能力变化。使用胰岛素恢复mTORC1活性,检测各组增殖与迁移能力变化。结果与常氧小鼠(Normoxic)相比,慢性低氧组小鼠(CH-PH)肺动脉Rasal2 mRNA[(2.57±0.15)和(1.02±0.09),P<0.001]和蛋白[(2.18±0.36)和(0.97±0.14),P<0.001]表达显著升高。与常氧组(Normoxic)细胞相比,低氧组(Hypoxic)细胞处理12、24 h后Rasal2 mRNA[(2.41±0.20)、(2.86±0.24)和(1.03±0.12);均P<0.001]和蛋白[(2.50±0.32)、(2.79±0.38)和(1.13±0.12);均P<0.01]表达显著升高。与siCon转染组相比,siRasal2转染组细胞Rasal2表达显著降低[(1.09±0.09)和(0.33±0.04);P<0.001]。与Normoxic+siCon组相比,Hypoxic+siCon组Ki-67阳性细胞比例[(62.75±7.54)%和(13.90±2.35)%;P<0.001]、迁移细胞比例[(305.25±58.28)%和(88.90±13.67)%;P<0.05]、p-S6^(Ser235/236)/S6[(3.27±0.24)和(1.06±0.14);P<0.001]、p-4EBP1^(Thr37/46)/4EBP1[(2.95±0.15)和(1.07±0.06);P<0.001]表达均显著升高;而与Hypoxic+siCon组相比,Hypoxic+siRasal2组Ki-67阳性细胞比例[(19.25±5.34)%和(62.75±7.54)%;P<0.001]、迁移细胞比例[(115.25±19.00)%和(305.25±58.28)%;P<0.05]、p-S6^(Ser235/236)/S6[(1.90±0.06)和(3.27±0.24);P<0.001]、p-4EBP1 Thr37/46/4EBP1[(1.70±0.13)和(2.95±0.15);P<0.001]表达均显著降低。此外,与Hypoxic+siRasal2组相比,Hypoxic+siRasal2+Insulin组p-S6 Ser235/236/S6[(0.94±0.16)和(0.36±0.11);P<0.01]、p-4EBP1 Thr37/46/4EBP1[(0.99±0.09)和(0.61±0.03);P<0.01]表达、Ki-67阳性细胞比例[(61.25±3.10)%和(27.00±3.46)%;P<0.001]、迁移细胞比例[(315.00±21.49)%和(141.00±15.30)%;P<0.001]显著回升。结论Rasal2可通过mTORC1途径促进PASMCs增殖及迁移。