假丝酵母菌ERG11和ERG3基因突变与氟康唑耐药的研究

摘要

目的 分析假丝酵母菌ERG11和ERG3基因突变情况及其对氟康唑耐药的机制。方法 100株念球菌,体外药敏试验获得耐氟康唑的热带假丝酵母菌5株和白色假丝酵母菌9株,提获DNA,基于聚合酶链式反应(PCR)分别扩增分为以上假丝酵母菌的ERG11、ERG3基因。比较分析PCR产物和GenBank数据库外供的基因序列,进而探寻到基因突变点。结果 ITS1扩增后形成了片段规格类似的条带,在500~620 bp范围中。鉴定发现,分离到的100株假丝酵母菌内,其中热带假丝酵母菌、白色假丝酵母菌占真菌总数的65%,分别有15株和50株。其中9株白色假丝酵母菌株的氟康唑24 h最小抑菌浓度(MIC)>16 mg/L,确定其是耐药菌株;5株热带假丝酵母菌对氟康唑和伏立康唑双重耐药。PCR对临床分离获得的14株假丝酵母菌进行扩增,都获得了预期产物,规格和DNA Marker相比较,部位吻合,未形成非特异性产物带。基于Blast比较热带假丝酵母菌和白色假丝酵母菌的测序结果 ,将起始密码子ATG的A计数设定成1,基于此探寻到突变基因。5株热带假丝酵母菌ERG11基因存有同义、错义突变分别为5、4个,错义突变分别是Y132H、G487T、A530C、G533C;ERG3基因依次有7个和12个;白色假丝酵母菌ERG11和ERG3基因各发现4个同义突变,前者有3个错义突变,后者为0。分析ERG11基因序列以后,发现其在氟康唑敏感菌株仅是发生了单个突变,康唑剂量自身依赖敏感程度和耐药菌株内ERG11基因突变以多位点错义突变同时出现为主。结论 假丝酵母菌ERG11、ERG3均存在程度不一的突变,其可能参与假丝酵母菌耐药性形成过程。