重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子质量肽图分析及二硫键定位

摘要

目的采用液相色谱-质谱联用技术绘制重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子的质量肽图并鉴定二硫键位点。方法重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子原液经变性、还原、烷基化、脱盐、胰蛋白酶和V8酶分别酶解后进行质量肽图分析;原液经变性、烷基化、脱盐、V8酶和V8酶结合胰蛋白酶分别酶解后进行二硫键定位鉴定。结果胰蛋白酶酶切的质量肽图共发现14个匹配肽段,V8酶酶切的质量肽图共发现18个匹配肽段,肽段覆盖率均为100%。经V8酶酶切仅鉴定到1种二硫键匹配方式即Cys55-Cys97,经V8酶结合胰蛋白酶酶切鉴定到2种二硫键匹配方式即Cys55-Cys97和Cys89-Cys122。结论应用液相色谱-质谱联用技术进行质量肽图分析和二硫键定位可作为重组蛋白药物质量控制方法。