人小龄胚胎神经干细胞的分离培养、扩增及鉴定

摘要

目的探索人胚胎神经干细胞的体外分离培养条件,从而在体外大量扩增神经干细胞;并观察神经干细胞增殖、分化的特点.方法从人胚胎脑分离神经干细胞,部分细胞冻存,另一部分细胞进行体外培养.采用无血清培养液,加入表皮生长因子(EGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)刺激细胞增殖,进行体外扩增、传代培养.采用免疫荧光法鉴定神经干细胞和分化的神经元及胶质细胞.结果从人胚胎脑分离的细胞在含有EGF和bFGF的无血清培养液中能形成大量的神经干细胞球,这些神经干细胞球可在体外扩增及传代培养.免疫荧光法鉴定神经干细胞球中大部分为神经上皮干细胞蛋白(nestin)表达阳性细胞.贴壁后可以分化出神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达阳性的细胞.经冻存后的胎脑细胞也能培养出具有同样特征的神经干细胞.结论在含有EGF和bFGF的无血清培养液中,从人胚胎脑能分离培养出神经干细胞,并能在体外大量扩增.这为人类神经干细胞的进一步研究和应用提供了材料.