髓样造血抑制因子(MPIF)存在一种新的mRNA剪切变异体

摘要

目的克隆并原核表达趋化因子,研究其结构与功能. 方法 RT-PCR技术,DNA测序和计算机网上比对,DNA重组及原核表达技术,离子交换层析技术,半固体骨髓集落培养. 结果在利用RT-PCR扩增趋化因子MPIF-1的过程中发现存在一种新的变异体形式.该变异体比MPIF-1多51个碱基,编码的蛋白质比MPIF-1长17个氨基酸,基因定位于人类第17号染色体上,其序列符合内含子和外显子的剪切规律,因而很可能为MPIF-1的mRNA不同剪切形式,将其命名为MPIF-1β.应用DNA重组技术构建原核表达质粒PKPL-MPIF-1β,转化大肠杆菌,诱导表达,获得重组蛋白.SDS-PAGE表明MPIF-1β的表达效率达15%,相对分子质量(Mr)约为(14～15)×103.功能研究表明,MPIF-1β有抑制小鼠骨髓集落形成的作用. 结论 MPIF-1β是与MPIF-1功能类似的新变异体.