环介导的等温扩增与实时荧光PCR检测问号钩端螺旋体的比较

摘要

目的通过比较环介导的等温扩增技术（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）与实时荧光PCR（real-time PCR）技术在检测问号钩端螺旋体的特异性及灵敏度方面的差异,寻找一种快速、灵敏且特异性强的问号钩端螺旋体检测方法。方法根据问号钩端螺旋体lipL41基因序列设计LAMP及实时荧光PCR扩增所用的特异性引物,对我国15群15株问号钩端螺旋体参考菌株进行检测,比较二者在检测的特异性和灵敏度方面的差异。结果 LAMP反应大约可在30 min内完成,整个分析过程不超过1 h。Real-time PCR的整个过程大约需要60 min。二者具有相同的检测灵敏度和特异性,最低检出限度均为100个拷贝,整个检测过程没有出现假阳性。结论在检测速度、灵敏度和特异性方面,LAMP技术与real-time PCR技术相当,但LAMP检测技术是在恒温条件下进行,不需要特别昂贵的仪器设备,检测方法简单,在基层实验室及现场检测方面具有明显的优势,是可应用于问号钩端螺旋体检测的一种有效技术。