狂犬病病毒糖蛋白真核表达质粒的构建及免疫原性的初步研究

摘要

目的构建狂犬病病毒糖蛋白基因DNA真核表达质粒,并检测其免疫原性。方法用RT-PCR法扩增和分离CTN株狂犬病病毒糖蛋白基因,测序后克隆至pcDNA5.0载体,构建重组质粒pcDNA5.0-G,提取质粒,转化293T细胞,检测糖蛋白瞬时表达,并以该重组质粒肌肉注射免疫BALB/c小鼠,狂犬病病毒CVS株攻击,观察小鼠存活情况。结果酶切、测序结果显示重组质粒pcDNA5.0-G构建成功,瞬时表达结果显示糖蛋白获得大量表达。经肌肉注射质粒常规免疫小鼠,病毒攻击后小鼠保护率为73.3%,对照组为6.7%。结论所构建狂犬病病毒糖蛋白真核表达质粒pcDNA5.0-G经肌肉注射免疫后可有效保护小鼠免受狂犬病病毒攻击,具有良好的免疫原性,这为后期核酸疫苗的研发奠定基础。