尿路致病性大肠杆菌ppk1基因缺失株的构建及其生物学特性研究

摘要

目的构建尿路致病性大肠杆菌CFT073的聚磷酸盐激酶1（polyphosphate kinase,PPK1）基因敲除株,并初步探索其体外生物学特性。方法以CFT073株为研究对象,利用Red同源重组技术敲除CFT073的ppk1基因,构建敲除株△pk1;通过细胞实验即以人膀胱癌上皮细胞5637为体外模型对CFT073野生型菌株、敲除菌株的黏附及侵袭能力进行比较;采用96孔板结晶紫染色法分析CFT073 ppk1基因敲除对其生物膜形成能力的影响。结果成功构建了CFT073 ppk1基因敲除株;敲除ppk1后,细菌对膀胱癌上皮细胞的黏附、侵袭能力较野生株都明显减弱;△pk1在各时间点570 nm处结晶紫吸光度值均较野生株的低。结论利用Red同源重组技术可成功敲除CFT073的ppk1基因,ppk1在尿路致病性大肠杆菌黏附、侵袭尿路上皮及生物膜形成过程中可能发挥了重要作用。