鼠抗人B7-H6单克隆抗体的制备及其生物学特性鉴定

摘要

目的制备鼠抗人B7-H6单克隆抗体并对其生物学特性进行鉴定。方法构建B7-H6真核表达系统, 转染小鼠成纤维细胞NIH/3T3, 潮霉素筛选获得稳转细胞株2H8, 腹腔免疫BALB/c小鼠, 采用杂交瘤技术进行细胞融合, 用流式细胞术筛选阳性克隆, 有限稀释法进行克隆化培养阳性杂交并鉴定其亚型。杂交瘤细胞株腹腔注射小鼠获得腹水型抗体, 经G-sepharose柱采用亲和层析法对小鼠腹水中的抗体进行纯化, 应用蛋白印迹和流式细胞术分析抗体的特异性。结果细胞融合后筛选培养出2株能够稳定分泌抗B7-H6单克隆抗体的杂交瘤细胞株2D12和9D1, 单抗亚类鉴定均属于IgG2a, 轻链为κ型。蛋白质印迹和流式细胞术证明其与B7-H6均有特异性反应。结论成功制备出高特异性抗人B7-H6单克隆抗体。