LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞炎症反应中环状RNA表达谱变化分析

摘要

目的分析环状RNA（circRNA）在脂多糖（LPS）诱导小鼠腹腔巨噬细胞炎症反应中的表达差异,初步探讨mmucirc0000790（以下简称为circ790）对LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞分泌促炎性细胞因子的影响。方法提取C57BL/6雌性小鼠腹腔巨噬细胞,用1 mg/L LPS刺激巨噬细胞,12 h后收集细胞及上清液,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测上清液中炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的含量;利用circRNA芯片检测LPS诱导组（n=3）和空白对照组（n=3）细胞中circRNA表达谱的变化。采用实时荧光定量PCR（RT-PCR）对部分差异表达的circRNA进行验证,并以circ790为研究对象,检测LPS诱导巨噬细胞炎症反应中circ790的动态变化。用小干扰RNA诱导小鼠腹腔巨噬细胞中circ790沉默,检测炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表达变化;运用生物信息学方法预测circ790相关的microRNA。结果与空白对照组相比,LPS诱导巨噬细胞12 h后上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α含量明显升高（P＜0.01）,证实巨噬细胞炎症反应模型构建成功。芯片筛查结果提示有34个circRNA的表达在LPS诱导组和对照组之间的差异有统计学意义（P＜0.05）,其中12个circRNA上调,22个circRNA下调。RT-PCR验证结果和芯片结果一致。LPS刺激巨噬细胞3、6、12h后,circ790表达水平较空白对照组上调了（1.94±0.15）、（3.18±0.13）和（4.21±0.22）倍（P＜0.05）。在转染si-circ790后,IL-6的分泌水平明显降低（P＜0.05）,但对IL-1β和TNF-α的水平没有明显影响（P＞0.05）。生物信息学提示circ790可能通过与microRNA发生相互作用从而调控巨噬细胞炎症反应。结论 LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞炎症反应后,circRNA表达谱发生显著变化,circ790可能参与调控了巨噬细胞分泌IL-6。