hIL-7-GM-CSF（7-127）融合蛋白的构建和E.coli表达

摘要

目的将ｈＩＬ－７基因与ｈＧＭ－ＣＳＦ（７－１２７）基因通过一中间接头（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３连接到一起，并在大肠杆菌中表达具有ｈＩＬ－７活性和极高ｈＧＭ－ＣＳＦ活性的ＩＬ－７－ＧＭ－ＣＳＦ（７－１２７）融合分子。方法通过引物设计和采用分级克隆的策略构建原核表达载体ｐＢＶ２２０－ＩＬ－７－ＧＭ－ＣＳＦ（７－１２７），并在大肠杆菌中表达ｈＩＬ－７－ＧＭ－ＣＳＦ（７－１２７）融合蛋白。连接ＩＬ－７与ＧＭ－ＣＳＦ（７－１２７）的中间接头为（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３。通过选择密码子，在（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３ｃＤＮＡ的中后部产生了一个ＢａｍＨⅠ位点，ＧＧＡ编码Ｇｌｙ，ＴＣＣ编码Ｓｅｒ。ＩＬ－７下游引物和ＧＭ－ＣＳＦ（７－１２７）上游引物的合成均起始于该位点。结果ｐＵＣ１８－ＩＬ－７－ＧＭ－ＣＳＦ（７－１２７）序列测定表明，ＩＬ－７、ＧＭ－ＣＳＦ（７－１２７）以及中间接头序列均与设计一致。活性测定结果表明，ｒｈＩＬ－７－ＧＭ－ＣＳＦ（７－１２７）的ｒｈＩＬ－７比活性约为１．６×１０６Ｕ／ｍｇ，ｈＧＭ－ＣＳＦ（７－１２７）比活性约为５×１０９～１×１０１０Ｕ／ｍｇ，比ｒｈＧＭ－ＣＳＦ标准品高５００～１０００倍。结论在ＩＬ－７－ＧＭ－Ｃ?