胍变性人胎盘碱性磷酸酶复性的研究

摘要

目的:检测胍变性人胎盘碱性磷酸酶复性过程中活力与构象的变化,探讨其折叠机制.材料与方法:应用分光光度法测定复性酶活力,荧光法检测其内源荧光发射光谱.结果:盐酸胍变性平衡态酶用直接稀释法及空气氧气法进行复性,其最适复性条件是:胍稀释浓度0.5 mol/L,温度4℃,复性液pH9.0,时间24小时.在此条件下,测得不同浓度盐酸胍变性酶经稀释复性后的酶活力及其内源荧光光谱显示:变性中间态酶复性后的酶活力及内源荧光光谱可恢复至天然态,而变性酶只能部分恢复,且随胍浓度的增加,恢复愈加困难,当胍浓度为6.0 mol/L时,变性态酶经复性后的酶活力与内源荧光光谱则完全不能恢复.结论:变性中间态酶可完全复性,而变性态酶仅部分复性,且与复性条件有关.