人乳腺癌组织中热休克蛋白70-肽复合物(HSP70-PC)的分离纯化

摘要

[目的]建立人肿瘤组织中热休克蛋白-70(hsp70)的分离鉴定方法.[方法]用手术切除的人乳腺癌组织为材料来源,制备匀浆,经100,000r/min超速离心处理后,依次上样于肝素-琼脂糖凝胶、ADP-琼脂糖凝胶柱进行亲和层析,所得蛋白经过7.5%与3.4%双层不连续SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,银染色后经凝胶成像系统分析确定其分子量,再用特异性抗体及碱性磷酸酶标记的二抗做Western Blot进行蛋白质性质与抗原性鉴定.[结果]经肝素-琼脂糖亲和层析后,在离子浓度0.03-0.23mol/L的梯度洗脱范围内得到富含HSP70的组分,其进一步经ADP-琼脂糖亲和层析,洗脱不结合组分,结合组分经鉴定确系相对分子量约为70 000Da的HSP70蛋白.[结论]用上述肝素-琼脂糖凝胶、ADP-琼脂糖凝胶柱进行蛋白质亲和层析法可分离获得纯度高、并保留肿瘤抗原信息的HSP70.