反向点杂交快速诊断非缺失型α-地中海贫血

摘要

目的建立一种简便快速筛查非缺失型α-地中海贫血点突变的反向点杂交 (reverse dot blot, RDB) 技术.方法将生物素直接标记在引物上,选择性扩增人α2珠蛋白基因,将PCR产物与固化在膜条上的寡核苷酸探针杂交,洗膜、显色后分析结果.结果采用生物素标记的引物Bio-C1和Bio-C3可选择性扩增α2珠蛋白基因,PCR产物长度为1085 bp,该标记片段与固相探针构成的反向点杂交检测体系,可以分辨出中国人群中已知的6种非缺失型α-地中海贫血点突变. 结论该反向点杂交检测体系无需巢式PCR扩增,一步选择性扩增的α2珠蛋白基因产物即可用于杂交;无需进行检测标记物(如生物素)反应,而将生物素直接标记在引物上;无需不同的洗膜条件,故较已报道的同类方法更为简单易行.RDB技术可用于快速诊断中国人非缺失型α-地中海贫血点突变.