人类白细胞抗原-DRB1第3外显子单链测序方法的建立及其多态性分析

摘要

目的 建立人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)-DRB1第3外显子单链测序方法,并分析其多态性.方法 采用组特异性引物扩增HLA-DRB1第2和3外显子序列,扩增产物经双酶切后进行双向测序分析,采用Assign 3.5 SBT分析软件指定等位基因型.结果 PCR产物经直接测序后得到清晰的序列冬,并向IMGT/HLA数据库提交了HLA-DRB1*08:09和DRB1*12:02:01第3外显子全部序列.在检测的25个等位基因中,HLA-DRB1第3外显子全长序列中存在27个单核苷酸多态性位点,占第3外显子序列碱基总数的9.56%.建立的方法可有效区分HLA-DRB1*14∶01∶01/14∶54歧义标本,证实中国人群中存在HLA-DRB1*14∶01∶01.结论 本实验建立的HLA-DRB1第3外显子测序方法是可行的,HLA-DRB1第3外显子存在多态性.