同位素稀释液相色谱串联质谱测定血清糖化白蛋白

摘要

目的 建立一种基于同位素稀释液相色谱串联质谱法(ID-LC/MS/MS)检测血清糖化白蛋白(GA)的准确定量方法.方法 本研究在日本临床化学学会(JSCC)推荐的ID-LC/MS方法上进行优化,采用阴离子交换色谱柱提纯白蛋白(Alb),使用重量法准确称量提纯标本、赖氨酸(Lys)和糖化赖氨酸(DOF-Lys)的标准溶液及两种的混合内标,将Alb酸水解为氨基酸,检测Lys和DOF-Lys从而定值GA.根据C62-A文件对建立的方法进行方法学评价并与常规方法进行比对研究.结果 蛋白电泳鉴定标本Alb纯度结果为100％.Lys和DOF-Lys线性标准曲线R2范围分别为0.997 8～0.999 9、0.999 4～1.000 0.血清GA测定的批内、批间和总的变异系数(CV)分别为0.69％～1.97％、1.13％～2.33％、1.37％～2.54％.正确度评价中三个浓度参考物质测定结果与认定值偏差分别为-2.56％、-1.87％、-2.94％.Lys和DOF-Lys的基质效应分别为89.92％、109.98％,携带污染率分别为-1.13％、-3.27％.Lys的检测限和定量限分别为0.075、0.248 nmol/g,DOF-Lys的检测限和定量限分别为0.007、0.024 nmol/g.方法 的相对扩展不确定度为1.60％～2.03％.与常规方法的拟合回归曲线R2为0.970 7.结论 建立了一种基于ID-LC/MS/MS法检测血清GA的方法,方法学评价准确可靠,有望作为血清GA检测的候选参考方法.