聚合酶链反应-微孔板杂交技术用于结核分枝杆菌的检测

摘要

目的建立结核分枝杆菌的PCR-酶联免疫吸附测定(ELISA)方法,使PCR结果判定更加客观.方法我们使用玻璃粉吸附提纯模板DNA,将PCR引物5′端标记生物素,用PCR产物与微孔板中预先包被的克隆靶基因杂交,然后用酶标链霉亲和素与杂交体中的生物素结合,最后用酶底物与所标记酶进行显色反应,通过测定其吸光度来判断结果.结果所建立的PCR-ELISA检测法可提高检测的灵敏度和特异性.对50份来自结核病人高度怀疑有结核分枝杆菌的标本检测表明,PCR-ELISA检出22份阳性,比抗酸染色法(7/50)、培养法(13/50)和PCR-电泳法(18/50)检出率高,而20份证实无结核分枝杆菌的标本,几种方法检查均为阴性.结论该法可敏感、特异和客观地检测临床标本中的结核分枝杆菌.