沙眼衣原体外膜蛋白2重组蛋白的表达纯化和免疫性鉴定

摘要

目的 表达沙眼衣原体外膜蛋白2,纯化表达产物,并对其免疫性进行鉴定.方法应用聚合酶链反应(PCR)技术获得沙眼衣原体D型外膜蛋白2第167～434位氨基酸的编码基因片段,将此片段克隆于表达载体pET28b(+),转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE、蛋白印迹试验分析表达产物,亲和层析法纯化重组蛋白;重组蛋白免疫家兔以检测其免疫原性.结果重组质粒酶切分析及DNA测序证实成功构建pET28b(+)/Omp2aa167～aa434表达质粒;通过优化表达和纯化条件,获得了相对分子质量约为35.0×103纯化蛋白产物,蛋白印迹试验证实该重组蛋白能与Ct 感染者阳性血清反应;ELISA法测定免疫血清特异性抗体效价在1:1 280以上.结论表达的重组外膜蛋白2aa167～aa434具有良好的免疫性.