酪氨酸激酶抑制剂伊马替尼对K562细胞的DNA损伤修复功能的影响

摘要

目的建立人类慢性粒细胞白血病（CML）细胞系K562细胞在伊马替尼（Imatinibmesylate）处理前、后的 DNA 损伤模型,探讨伊马替尼对 K562细胞的 DNA 损伤修复功能的影响。方法用噻唑蓝（MTT）法确定伊马替尼预处理 K562细胞的浓度;用免疫印迹法（Western blot）检测伊马替尼处理后 K562细胞 BCR/ABL 的磷酸化状态,以反映 BCR-ABL 酪氨酸激酶活性受抑制情况;用彗星实验检测不同浓度过氧化氢（H2O2）诱导的 K562细胞、伊马替尼预处理 K562细胞的 DNA 损伤模型;用彗星实验对各组细胞在 DNA 损伤后的修复进行动态观测。结果 MTT 实验结果显示,伊马替尼预处理 K562细胞的最佳终浓度为1μmol/L,作用时间24 h;Western blot 实验结果显示,该浓度的伊马替尼可有效抑制 BCR/ABL 融合蛋白第177位酪氨酸激酶磷酸化,密度比为0.100±0.018,与对照组（0.425±0.039）相比,降低了（77.11±5.59）%,差异有统计学意义（t=4.57,P＜0.05）;彗星实验确定了各组细胞 DNA 损伤模型的建立条件,采用10μmol/L 终浓度的H2O2对 K562细胞和伊马替尼预处理后 K562细胞进行染毒,H2O2作用温度和时间为4℃、10 min。修复结果显示,经伊马替尼预处理的 K562细胞修复时间为120 min,与未处理组修复时间60 min 相比,前者DNA损伤修复时间明显延长（F=97.79,P＜0.05）。结论本研究建立了伊马替尼处理前、后的白血病 K562细胞的DNA 损伤模型,BCR/ABL 融合蛋白的酪氨酸激酶抑制剂伊马替尼能减弱 K562细胞的 DNA 损伤后修复能力。