定量检测幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白基因A方法的建立

摘要

目的:建立定量检测细胞毒素相关蛋白基因A(cagA)阳性幽门螺杆菌(Hp)的方法。方法:利用含Hp cagA的质粒(P^(MC3))作为外参照品,在微孔板中对PCR扩增cagA的产物进行辣根过氧化物酶标记的探针杂交及酶促显色。结果:当PCR反应体系中原始模板为1～10~5拷贝、循环次数小于或等于25时,原始模板以相对固定的指数形式增加,在该范围内适宜定量分析。通过对20份已知Hp菌株cagA的检测符合率达100％,观察结果的敏感度较电泳法提高了200倍。定量检测不同胃粘膜组织中cagA阳性Hp,检出底限为6拷贝/mg组织。结论:本方法特异性强,敏感度高,对研究Hp与消化道疾病的关系有实用价值。