冠通方含药血清通过miR-223/NLRP3信号通路调控血管内皮细胞焦亡的作用及机制研究

摘要

目的:探究冠通方含药血清通过microRNA-223(miR-223)/NOD样受体家族3(NLRP3)信号通路调控血管内皮细胞焦亡的作用及机制研究。方法:将血管内皮细胞系人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)分为对照组、模型组、空白血清组和含药血清组。对照组仅进行常规培养,其余3组采用氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导HUVECs细胞损伤模型,模型组不进行任何干预,空白血清组采用空白血清干预,含药血清组则采用冠通方含药血清进行干预。实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测细胞中miR-223 mRNA表达,蛋白质印迹法(Western Blot)检测NLRP3、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase1)的蛋白表达,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)的含量,细胞计数试剂盒(CCK8)检测细胞活性,并计算乳酸脱氢酶(LDH)释放水平。碘化丙啶(PI)染色荧光显微镜下观察细胞膜完整性和细胞焦亡情况。结果:与对照组相比,模型组HUVECs细胞活力明显降低(P0.05),含药血清组的细胞活力则明显增强(P0.05),含药血清组LDH释放水平则明显下降(P0.05),含药血清组IL-1β、IL-18含量明显下降(P0.05),含药血清组Caspase1蛋白表达明显下调。与空白血清组相比,含药血清组HUVECs细胞内miR-223的表达明显上调(P<0.05),NLRP3的表达明显下调(P<0.05)。结论:冠通方含药血清通过上调miR-223下调NLRP3,抑制炎性因子IL-1β、IL-18水平,抑制Caspase1诱导的血管内皮细胞焦亡,提示冠通方对于冠心病病人的血管内皮细胞具有较好的保护作用。