粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子编码基因对乙型脑炎DNA疫苗细胞免疫增强效应的影响

摘要

目的研究粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）编码基因对乙型脑炎（JE）DNA疫苗细胞免疫应答的影响。方法套式RT-PCR法获取BALB/c小鼠GM-CSF编码基因,构建含乙型脑炎病毒（JEV）前膜（prM）-包膜（E）蛋白与GM-CSF编码基因以及单纯GM-CSF编码基因的重组质粒,分别命名为pJME/GM-CSF和pGM-CSF。脂质体法转染上述质粒入中华仓鼠卵巢细胞（CHO）,免疫荧光法检测编码蛋白的表达与分布。流式细胞仪检测经不同组合的免疫原免疫后小鼠脾T淋巴细胞亚群及Th细胞内细胞因子（IFN-γ、IL-4）变化,LDH法测定CTL活性。数据行单因素方差分析及最小显著差数法比较。结果重组质粒pJME/GM-CSF与pGM-CSF经鉴定构建正确,所编码的蛋白主要分布于胞质,少量分布于胞膜。pJME/GM-CSF组CD4+ T淋巴细胞比例为（33.90±0.79）%,明显高于其他组（t值分别为9.818、6.804、6.594、10.061、9.380和17.675,均P＜0.05）。pJME+pGM-CSF同时注射组及pGM-CSF注射3 d后接种pJME组CD4+ T淋巴细胞比例分别为（29.83±0.61）%、（29.70±0.51）%,高于pJME注射3 d后接种pGM-CSF组的（27.69±0.50）%（t=3.466、t=3.255,P＜0.05）。pJME/GM-CSF组与pJME+pGM-CSF同时注射组CD8+ T淋巴细胞比例较空载体（pcDNA3.1+）组及JE灭活疫苗组升高（t值分别为3.811、2.627、10.537和3.811,均P＜0.05）。pJME/GM-CSF组CTL活性为（51.48±0.10）%,明显高于其他组（t值分别为22.868、13.823、5.377、32.287、34.632和53.795,均P＜0.05）。pJME/GM-CSF组、pJME+pGM-CSF同时注射组及pGM-CSF注射3 d后接种pJME组IFN-γ/IL-4比值分别为19.13±1.36、12.32±0.82、7.05±0.43,明显高于其他组（P＜0.05）。结论 GM-CSF编码基因可增强JE DNA疫苗的细胞免疫应答效应。