微小RNA-1187对半胱天冬氨酸蛋白酶-8介导的肝细胞凋亡调控的作用

摘要

目的通过微小RNA-1187（miR-1187）靶向调节半胱天冬氨酸蛋白酶-8（caspase-8）mRNA的表达,观察miR-1187对肝细胞凋亡的调控作用。方法应用D-氨基半乳糖联合脂多糖构建BALB/c小鼠急性肝功能衰竭模型,取肝组织进行锁核酸（LNA）-miRNA微阵列分析和miRNA靶基因功能分析。体外培养胚胎小鼠肝细胞株2（BNL-CL2细胞）,予以TNFα联合D-氨基半乳糖分别诱导转染miR-1187模拟物组及未转染组,以正常生长细胞为对照,应用实时（RT）PCR、Western印迹等方法检测各组细胞miR-1187、caspase-8 mRNA及caspase-8蛋白的表达,并采用流式细胞技术测定细胞凋亡率。组间均数比较采用t检验。结果 miR-1187的信号值随急性肝功能衰竭进展明显下降。miR-1187与caspase-8 mRNA的3’非编码端（3’UTR）有直接的结合位点关系;miR-1187在未转染组表现为显著下调,在转染组下调减缓（t=6.371,P＜0.01）;caspase-8 mRNA在未转染组表达显著增高,在转染组上升明显减少（t=4.539,P＜0.01）;转染组细胞凋亡率明显低于未转染组（t=3.365,P＜0.05）。结论 miR-1187为肝细胞凋亡的抑制因子之一;高表达miR-1187通过靶向调节caspase-8 mRNA的表达,阻抑肝细胞凋亡的发生。