p38MAPK基因沉默对PM2.5染毒肝细胞后癌基因和凋亡基因表达的影响

摘要

目的研究p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）基因沉默对大气细颗粒物（PM2.5）染毒肝细胞（L02细胞）相关基因表达的影响。方法于2019年6至9月, 根据GenBank提供的p38MAPK基因序列, 设计合成3条干扰序列, 退火后连接到PLVX-shRNA2-puro中, 将重组慢病毒载体转染L02细胞。用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）和蛋白免疫印迹（Western blotting）法对p38MAPK基因沉默效果进行鉴定。用浓度为50 μg/ml的PM2.5水溶物和10 μmol/L阳性对照Cr6+分别染毒L02细胞、p38MAPK基因沉默细胞24 h, 同时设立空白对照组。用荧光定量PCR检测癌基因（c-fos、c-myc、k-ras）、抑癌基因（p53）和凋亡基因（Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9）的相对表达水平。结果 p38MAPK基因沉默细胞中p38MAPK基因和蛋白表达水平较正常L02细胞明显下降（P＆0.05）, p38MAPK基因沉默细胞株构建成功。与空白对照组比较, PM2.5染毒L02细胞组癌基因c-fos、c-myc、k-ras和凋亡基因Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9表达水平升高, 抑癌基因p53表达水平下降, 差异均有统计学意义（P＆0.05）;与PM2.5染毒L02细胞组比较, PM2.5染毒p38MAPK基因沉默细胞组癌基因c-fos、c-myc、k-ras和凋亡基因Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9表达水平下降, 抑癌基因p53表达水平升高, 差异均有统计学意义（P＆0.05）。结论 PM2.5对L02细胞癌基因、抑癌基因和凋亡基因表达有明显影响, 而p38MAPK基因沉默可抑制PM2.5对L02细胞的影响。