抗钠-钙交换体α-2(840-877)单克隆抗体3F10的制备及其预处理对大鼠缺血性心律失常的抑制作用

摘要

cqvip:目的:制备和纯化抗钠-钙交换体(Na+-Ca 2+exchanger,NCX)α-2(840-877)单克隆抗体,并观察该抗体对大鼠缺血性心律失常的影响。方法:利用化学合成的NCXα-2(840-877)肽段为免疫原免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术和间接ELISA法筛选,获得可稳定分泌NCXα-2(840-877)单克隆抗体的杂交瘤细胞株。通过ELISA和SDS-PAGE等方法检测其效价和纯度。结扎冠脉左前降支建立大鼠缺血性心律失常模型。缺血前5 min用3F10(10μg/ml)抗体灌注离体心脏,在体实验经大鼠尾静脉注射3F10(50μg/kg)抗体,观察抗体大鼠室早数目、室速和室颤发生率和持续时间的影响。应用全细胞膜片钳技术观察3F10(10μg/ml)抗体对正常大鼠心肌细胞I Na/Ca的影响。结果:①成功制备并获得抗NCXα-2(840-877)单克隆抗体3F10,其效价和浓度分别为1∶40960、1.62 mg/ml。②3F10抗体预处理可明显抑制大鼠离体和在体缺血性心律失常的发生。缺血前5 min给予3F10(10μg/ml)抗体预处理后,离体心脏的室速、室颤的发生率分别由100%和77.78%降至25%和25%,其持续时间和室早的个数也明显减少(P<0.05)。在麻醉大鼠,当给予3F10(50μg/kg)抗体预处理后,与模型组相比,大鼠室速和室颤的发生率分别由100%和83.33%降至33.33%和33.33%,其持续时间及室早的数目均明显减少(P<0.05)。③膜片钳实验发现3F10抗体(10μg/ml)对I Na/Ca具有显著抑制作用。在钳制电位为+50 mV和-100 mV时,外向和内向I Na/Ca分别由(3.23±0.05)和(-50.57±0.13)pA/pF降至(2.14±0.03)和(-3.14±0.06)pA/pF(P<0.05)。结论:成功获得一株可稳定分泌抗NCXα-2(840-877)单克隆抗体的杂交瘤细胞株(3F10),该抗体预处理对大鼠缺血性心律失常具有显著抑制作用,推测其作用机制与抑制心肌I Na/Ca有关。