以烟草花叶病毒为载体的μE3单克隆抗体的制备及鉴定

摘要

目的:获得半抗原雌三醇(μE3)高特异性和高亲和力的单克隆抗体。方法:本研究利用烟草花叶病毒(TMV)作为抗原的载体,通过化学方法与半抗原雌三醇(μE3)连接形成TMV-EPMK-μE3复合体,利用该复合体免疫小鼠,再通过杂交瘤筛选技术来获得具有高亲和力的μE3单克隆抗体。结果:TMV-EPMK-μE3免疫的小鼠血清效价达到1∶100 000,通过细胞融合及筛选获得4株分泌抗体效价较高的杂交瘤细胞,然后进行了亚克隆,分别命名为TE1-1、TE2-1、TE3-1和TE 4-1。抗体的效价均在10-8左右,最低检测限约为1 ng。SDS-PAGE电泳结果显示4株抗体分别在25 kD和50 kD处各有一条清晰的条带,纯度都在95%以上。获得的4株抗体通过罗氏亚型鉴定试剂盒测定轻链类型均为κ;TE2-1和TE4-1单抗重链为IgG2a、 TE1-1和TE3-1单抗重链为IgG2b。TE1-1和TE3-1为TMV-EPMK-μE3的特异性抗体。结论:利用烟草花叶病毒(TMV)作为抗原载体,提高了半抗原μE3免疫原性,进而使μE3能够刺激机体产生有效免疫应答。