目的:建立一种快速、准确检测T细胞受体重排删除环(TRECs)的方法,用来评价慢性乙型肝炎患者胸腺输出功能.方法:根据T细胞受体(TCR)基因序列设计引物与探针,建立TaqMan-MGB双标记探针技术定量测定外周血中TRECs的含量,通过重复性、敏感性、准确性实验评价该方法的可靠性;并将此技术应用于慢性乙型肝炎中型(CHB)患者中评价胸腺输出功能.结果:通过多次试验成功建立了检测TRECs含量的TaqMan-MGB双标记探针实时荧光定量检测方法,并对5×105copies的质粒进行10倍法稀释,最低检出可达50 copies;对6.18 Lg copies/106PBMCs和3.54 Lg copies/106PBMCs高低浓度标本同一批次进行25次检测结果平均值为6.08±0.14,3.52±0.18 Lg copies/106PBMCs批内变异系数分别为2.26％,5.12％,对这两份标本连续5 d重复20次试验结果平均值为6.10±0.23,3.51±0.22 Lg copies/106PBMCs批间变异系数分别为3.85％、6.27％;用双蒸水代替模板进行检测无目的基因扩增.35例健康成年人外周血TRECs平均含量为5.62±1.38 Lg copies/106PBMCs,45例同年龄段CHB患者外周血TRECs平均含量为4.09±0.97 Lg copies/106PBMCs,两者差异存在统计学意义(t=11.25,P<0.05).结论:TaqMan-MGB双标记探针时荧光定量PCR技术检测TRECs特异性强,灵敏度高,重复性好;成年CHB中型患者外周血TRECs含量明显低于同龄健康人群,TRECs可用于CHB患者胸腺功能的评估.
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