鼠成纤维细胞因子8的克隆和表达

摘要

目的:克隆和表达鼠成纤维细胞因子8(FGF-8),以便进一步研究FGF-8的功能.方法:根据已发表的鼠成纤维细胞因子8的cDNA序列,从鼠胚胎中提取总RNA,采用RT-PCR技术,用设计合成的引物钓取cDNA片段.将该cDNA片段定向插入酵母表达载体pYEX4T-1中,做DNA序列分析.用此重组质粒转化酿酒酵母,经Western印迹分析表达产物.用MTT和3H-TdR掺入法检测重组蛋白活性.结果:经序列分析证明,所钓取到的600 bp的cDNA片段确实是FGF-8的"b"选择性剪接型(FGF-8b).Western印迹分析表明,该基因获得了较高效的表达,分子量约55 kD.实验组成纤维细胞株NIH3T3的MTT和3H-TdR掺入量明显增多,拮抗组的掺入量有所下降.结论:获得了有活性的重组鼠FGF-8蛋白,该蛋白能刺激NIH3T3生长,并且这种活性能被重组人FGFR-1的细胞外段所拮抗.