热休克蛋白gp96-肽复合物的提取及纯化

摘要

目的:建立从H22肝癌细胞中提取、纯化热休克蛋白gp96-肽复合物的方法.方法:①制备H22肝癌细胞蛋白:将H22肝癌细胞裂解、离心、过滤及透析后获得.②gp96-肽复合物的纯化:上述可溶性H22肝癌细胞蛋白经分级硫酸铵盐析后,依次用ConA-Sepharose亲和层析、Sephadex G25更换缓冲液及DEAE-Sephacel离子交换层析分离纯化.③gp96-肽复合物的鉴定和浓度测定:所得蛋白经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blot进行蛋白分子量及性质鉴定,Lowry法测定蛋白浓度.结果:分离、纯化得到的蛋白经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染鉴定为单一带,分子量为96 kD;Western blot结果证实为HSP gp96.每20 ml 压积H22细胞最终获得1 mg的HSP gp96.结论:使用本分离纯化方法可获得高纯度HSP gp96肽复合物.