胸腺基质细胞支持下骨髓CD34+细胞向T细胞体外定向分化

摘要

目的:研究人骨髓CD34+细胞体外向T细胞定向分化的方法,为研究造血细胞淋系造血活性及T细胞发育和分化提供技术平台.方法:免疫磁珠法分离骨髓CD34+细胞,在骨髓基质细胞条件培养液构建的微环境下,在胸腺基质细胞的支持下,使其体外向T细胞定向分化,收集培养的非贴壁细胞,免疫荧光染色后经流式细胞术检测培养不同时间CD1-CD3+细胞、CD3+CD4+CD8-细胞及CD3+CD4-CD8+细胞比例.结果:培养1周时,培养细胞中以不成熟的CD1+CD3-细胞、CD1+CD3+细胞为主,可检测到少量CD1-CD3+细胞,随培养时间延长,不成熟细胞比例逐渐减少,而成熟的CD1-CD3+细胞比例逐渐增加;在CD3+细胞中,培养初期以不成熟的双阳性细胞CD4+CD8+为主,而成熟的单阳性CD4+CD8-细胞及CD4-CD8+细胞占极小比例,随培养时间延长,双阳性细胞比例逐渐减少,而成熟的单阳性细胞比例逐渐增高;而无胸腺基质细胞支持的CD34+细胞仅在培养初期检测到成熟细胞存在,而培养后4周基本检测不到成熟T细胞的存在.结论:在骨髓基质细胞及胸腺基质细胞的支持下,骨髓CD34+细胞可体外发育为成熟的CD1-CD3+细胞及单阳性T细胞,其中胸腺基质细胞的支持对于造血细胞向T细胞的体外定向分化极其重要.