生鲜葱白中粗酶的提取研究

摘要

目的:研究从生鲜葱白中提取粗酶的方法,为下一步分离纯化和临床应用提供依据。方法:采用葱白中提取的混合底物,用丙酮酸法测定葱白中酶的活力,采用磷酸盐缓冲液提取粗酶,以小牛血清白蛋白为标准,用考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质的浓度。结果:pH6.5的Na-K磷酸盐缓冲液+10%甘油+0.2%EDTA,预冷12 h,临用前加5’-磷酸吡哆醛为浸提液所提取粗酶的相对比活度较高,故定该组分为葱白中粗酶提取的浸提液;PEG用量为15%时上清中酶活急剧减小,随后趋于平缓趋势,该浓度下的上清液中的酶的比活度相对最小,故选择该浓度为沉淀蛋白时PEG8000的浓度;随着透析时间的延长,蛋白质溶液中蛋白质含量及酶活性均在下降,透析6 h和24 h的蛋白质溶液中酶活性和蛋白质含量均相差不大,可以说明当透析6 h后,透析基本已经达到平衡。结论:该方法操作简便可以用于生鲜葱白中粗酶的提取。