人、猪、鼠血管内皮及平滑肌细胞培养与纯化方法的改进

摘要

对培养和纯化猪主动脉内皮细胞、人脐静脉内皮细胞、猪和鼠主动脉平滑肌细胞的方法进行改进.对其鉴定方法进行了讨论.用胶原酶或胰酶消化法,或机械法分别从猪主动脉、人脐静脉、鼠主动脉获得内皮细胞和平滑肌细胞进行培养,用光学相差显微镜、免疫组化的方法进行鉴定.结果显示,相差显微镜观察:人脐静脉内皮细胞接种后2～3小时贴壁,继而铺开生长.在视野内形成散在细胞团.细胞呈铺路石样排列的单层.随着传代次数增多,可见核分裂、双核及多核.猪血管内皮细胞呈鹅卵石样,多角形,生长分裂旺盛时可见两个或多个核.猪和鼠的平滑肌细胞在相差显微镜下外观为长梭形,细胞生长致密时排列成束,相互平行,并且重叠生长,表现为典型的"波峰”与"浪谷”状.猪血管内皮细胞DiI-Ac-LDL染色,在荧光显微镜下显示特征性的黄绿色荧光.人Ⅷ因子抗原免疫组化检测人脐静脉内皮细胞,显微镜下可见核周胞浆呈现阳性反应.免疫组织化学法进行平滑肌细胞α-肌动蛋白染色,显微镜下见细胞浆内着色.本文介绍的培养及纯化猪血管内皮细胞、猪平滑肌细胞、鼠平滑肌细胞的方法简便易行.