甲胎蛋白调节肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体2表达及其对Bel 7402细胞耐受该配体的影响

摘要

目的研究甲胎蛋白（AFP）对肝癌细胞肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）受体2（DR5）表达及其在肝癌细胞耐受TRAIL中的作用。方法用Western blot法分析全反式维甲酸（ATRA）处理人肝癌细胞株Bel 7402细胞24 h后DR5表达的变化;免疫共沉淀（Co-IP）技术研究AFP与维甲酸受体（RAR）-β相互作用;激光共聚焦显微镜观察AFP与RAR-β的细胞共定位;RNA干扰技术抑制Bel 7402细胞AFP表达,再用ATRA处理24 h后检测细胞内DR5表达的变化;用pcDNA3.1质粒和人AFP基因连接构建表达AFP的载体（称为pcDNA3.1-afp）,然后转染到不表达AFP的人肝癌细胞株HLE细胞;细胞生长状况用四甲基偶氮唑盐法检测。组间比较用t检验进行统计学分析。结果 Bel 7402和HLE细胞低表达DR5,ATRA（160 mol/L）处理24 h后能促进肝癌细胞DR5表达;Co-IP技术研究显示AFP能与RAR-β结合;共聚焦显微镜观察发现AFP与RAR-β共定位于细胞质;干扰AFP表达后,Bel 7402细胞的DR5表达明显提高,抑制AFP表达后,ATRA能显著促进Bel 7402细胞内DR5的表达,并增加Bel 7402细胞对TRAIL的敏感性;转染pVDNA3.1-afp载体后,HLE细胞内的AFP能与RAR β结合,并发现pcDNA3.1-afp载体能对抗TRAIL诱导HLE细胞凋亡。结论 Bel 7402细胞内表达的AFP具有抑制DR5表达的生物学功能;AFP可能通过抑制RAR-β入核调节DR5的表达;细胞内高表达的AFP是导致Bel 7402细胞耐受TRAIL诱导细胞凋亡的重要原因。