基于核酶自剪切机制稳定分泌丙型肝炎病毒的细胞模型

摘要

目的利用核酶自剪切机制建立稳定分泌HCV的细胞膜型。方法以HCV感染性克隆的全基因组cDNA重组质粒为基础,在基因组两侧引入核酶序列,构建重组质粒pJFH1-核酶,并转染入HepG2细胞,加入G418溶液筛选整合有该质粒的细胞克隆。用荧光定量PCR、免疫荧光、Western blot、透射电镜等技术挑选稳定分泌HCV的单细胞克隆。结果成功筛选到稳定分泌HCV的单细胞克隆,该细胞克隆能够有效产生HCV相关蛋白,上清液中HCV滴度达到1×10~7拷贝/ml,电子显微镜观察HCV直径为55 nm,上清液中病毒滴度随干扰素α浓度的升高而降低。结论利用核酶自剪切机制可建立稳定分泌HCV的细胞模型,该模型可用于抗HCV药物的筛选。