急性乙型肝炎患者特异性核心抗原细胞毒性T淋巴细胞频率的变化及其意义

摘要

目的动态观察急性乙型肝炎（AHB）患者外周血HBcAg18～27表位特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）、血清ALT、HBV DNA、HBsAg和淋巴细胞亚群的变化,探讨HBV特异性CTL频率的消长在病毒清除以及肝脏损伤中的作用。方法分别选取AHB、慢性乙型肝炎（CHB）患者外周血,根据人类白细胞抗原（HLA）-A0201结果分为两组:HLA-A0201阳性患者作为HBV特异性CTL检测组、HLA-A0201阴性患者作为特异性抗原表位对照组。用HLA-A0201限制性表位HBcAg18～27五聚体复合物通过流式细胞技术,动态定量检测外周血中HBV特异性CTL频率和T、B淋巴细胞与自然杀伤细胞（NK）和NKT淋巴细胞;以速率法检测血清ALT水平;荧光定量PCR检测HBV DNA水平;Abbott微粒子化学发光技术检测HBV血清学标志物。计量资料采用均数±标准差（（?）±s）表示或中位数（P25-P75）描述,组间比较采用方差分析或非参数检验（Kruskal-Wallis检验和Mann-Whitney U检验）;两种计量指标的关系采用Pearson相关分析。结果 AHB患者入院第1、2、3周外周血HBcAg表位特异性CTL频率分别为2.11%（0.20%～3.64%）、3.56%（1.05%～5.91%）、2.03%（0.33%～3.58%）,高于入院第4、5、6周的0.99%（0.12%～2.16%）、0.29%（0.05%～0.76%）、0.39%（0.05%～0.46%）,也显著高于CHB的0.11%（0.06%～0.29%）,z值分别为-3.258,-4.041,-3.259,P值均＜0.01。AHB患者HBcAg表位特异性CTL峰值延迟于血清HBV DNA、HBsAg和ALT等指标的峰值;在AHB患者中,HBcAg表位特异性CTL高频率患者的血清HBsAg消失时间早于CTL频率较低的患者[（1.75±1.04）周与（4.33±3.51）周,t=-2.018,P＜0.05]。CD3+CD8+T淋巴细胞频率的峰值出现在入院后第2周,并与HBcAg表位特异性CTL峰值相重叠,两者动态变化规律呈相关性（r=0.420,P＜0.01）。AHB患者早期外周血NK、NKT淋巴细胞数量显著低于正常对照组和CHB患者,但随着病情好转而逐渐恢复,AHB患者外周血NK细胞数量变化与HBcAg特异性CTL动态变化呈负相关（r=-0.435,P＜0.01）。结论急性HBV感染者高频率的HBcAg表位特异性CTL与HBsAg的更早消失有密切关系,动态监测外周血中HBcAg特异性CTL频率变化,可以作为预测HBV感染后临床转归的参考指标;AHB患者外周血CD8+ T淋巴细胞数量的变化,可以间接反应AHB患者体内HBcAg特异性CTL频率的改变。