非经典Wnt信号通路在2型糖尿病大鼠非酒精性脂肪性肝炎发生与发展中的作用

摘要

目的探讨非经典Wnt信号通路在2型糖尿病大鼠非酒精性脂肪性肝炎（NASH）发生与发展中的作用。方法将雄性SD大鼠24只随机等分为对照组和模型组。对照组喂以基础饲料;模型组喂以高糖高脂饲料。4周后,模型组注射链脲佐菌素（30mg/kg）诱导2型糖尿病（T2DM）。各组继续对应饲料喂养至12周,模型组成功造模为T2DM-NASH模型。取血清及肝脏组织。检测血清葡萄糖、ALT、AST水平;苏木素-伊红及油红O染色观察肝脏病理改变;免疫组织化学、Western blot检测肝脏Wnt5a、NF-κB p65蛋白的表达;实时PCR定量检测肝脏Wnt5a mRNA、NF-κB p65 mRNA的表达,分别与对照组比较。数据以均数±标准差（x±s）表示,采用t检验和直线相关与回归分析进行统计学分析。结果对照组和T2DM-NASH组中,血清葡萄糖分别为（6.25±1.28）mmol/L和（31.21±0.86）mmol/L,t=-36.204;血清ALT分别为（31.00±3.69）U/L和（301.50±8.62）U/L,t=-99.94;血清AST分别为（77.58±1.83）U/L和（344.75±1.82）U/L,t=-358.85,P值均＜0.01。苏木素-伊红及油红O染色显示肝细胞脂肪变性及肝组织炎症。免疫组织化学结果显示对照组和T2DM-NASH组的Wnt5a表达量（积分吸光度）分别为1.15E4±577.45和4.04E5±2.42E4,t=-56.24;NF-κB p65表达量（积分吸光度）分别为1.28E4±1.59E3和4.21E5±1.68E4,t=-83.895,P值均＜0.01。Western blot结果显示T2DM-NASH组Wnt5a蛋白相对表达量和对照组相比为4.21±0.34比1.00±0.25,t=17.030;T2DM-NASH组NF-κB p65蛋白相对表达量和对照组相比为4.93±0.76比1.00±0.13,t=11.438,P值均＜0.01。实时定量PCR结果显示T2DM-NASH组Wnt5a mRNA相对表达量和对照组相比为9.53±0.64比1.04±0.35,t=20.165,P＜0.01;T2DM-NASH组NF-κB p65 mRNA表达量和对照组相比为0.60±0.13比0.74±0.10,t=-1.802,P=0.125。相关性分析结果表明T2DM-NASH组肝组织Wnt5a蛋白表达水平分别与血清ALT、AST水平存在正相关性（r=0.64,P＜0.05;r=0.59,P＜0.05）。肝组织Wnt5a与NF-κB p65蛋白表达存在正相关性（r=0.58,P＜0.05）。结论 Wnt5a可能通过激活NF-κB介导炎症反应参与到T2DM合并NASH的发生与发展。