蛋白磷酸酶2A催化亚基α显性负性突变体表达载体对肝癌细胞生长的影响

摘要

目的构建肝癌组织特异性启动子驱动的蛋白磷酸酶2A催化亚基α显性负性突变体（DN-PP2Acα）表达载体,研究其对肝癌细胞生长的影响。方法将甲胎蛋白（AFP）基因的增强子和磷酸甘油酸激酶（pgk）基因的启动子组合形成的肝癌组织特异性AFpg启动子。采用定点突变将野生型蛋白磷酸酶2A催化亚基α（PP2Acα）突变为DN-PP2Acα将AFpg启动子和DN-PP2Acα编码序列构建成AFpg启动子调控的DN-PP2Acα表达载体pGL3-Basic-AFpgPP2Acα。荧光素酶报告基因实验检测AFpg启动子的转录活性。质粒pcDNA3.1（+）、pGL3-Basic、pcDNA3.1（+）-DN-PP2Acα、pGL3-Bamc-AFpg、pGL3-Basic-AFpg-PP2Acα分别转染LO2、SKHep-1、HepG2和Hep3B细胞,Western blot检测PP2Ac蛋白表达水平,四甲基偶氮唑盐比色法检测细胞生长情况。成组t检验分析不同处理组间的细胞活力差异。结果 LO2、SK-Hep-1、HepG2和Hep3B细胞中,AFpg启动子相对荧光素酶活性分别为3.61±1.07、3.46±0.66、98.70±18.60、88.70±19.53,AFpg启动子在表达AFP的细胞中具有高转录活性。pGL3-Basic-AFpgPP2Acα可特异性地使DN-PP2Acα表达于AFP阳性肝癌细胞HepG2和Hep3B,并抑制其生长,转染72 h后,HepG2细胞活力下降42.65%±3.99%,Hep3B细胞活力下降39.87%±3.91%,与O h时比较,差异均有统计学意义（t值分别为13.0563和12.9920,P值均＜0.01）。pGL3-BasicAFpg-PP2Acα对AFP阴性细胞的生长无明显影响。结论 AFpg启动子调控的DN-PP2Acα表达载体特异性地抑制AFP阳性肝癌细胞的生长,可用于肝癌组织特异性基因治疗。