缺氧环境中Netrin-1对肝癌细胞骨架重组的作用研究

摘要

目的研究缺氧对人肝癌细胞HepG2细胞骨架重组的影响及Netrin-1在细胞骨架重组中的作用。方法通过1%O2低氧培养建立人肝癌细胞HepG2物理缺氧模型,观测缺氧对细胞形态的改变。构建针对Netrin-1 mRNA的干扰质粒pshRNA-Netrin-1及阴性对照质粒pGensil-1,并将其转染HepG2细胞,筛选稳定转染细胞株。观测转染pshRNA-Netrin-1质粒前后,鬼笔环肽检测缺氧对肝癌细胞对HepG2细胞骨架重组的影响,细胞迁移实验检测缺氧条件下干扰Netrin-1对细胞迁移能力的影响。同时构建Netrin-1真核表达质粒pGNET1转染HepG2细胞,观测Netrin-1对肝癌细胞骨架重组的作用。结果低氧培养HepG2细胞胞体变得狭长,细胞连接松散。Netrin-1蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）。HepG2细胞稳定转染pshRNA-Netrin-1后,Netrin-1 mRNA表达显著下降,抑制率达73.32%±4.12%（P＜0.01）。鬼笔环肽检测F-actin结果显示,缺氧促进HepG2细胞骨架重组,转染pshRNA-Netrin-1后,缺氧促进HepG2细胞骨架重组受到显著抑制。细胞迁移实验结果显示,缺氧条件下干扰Netrin-1的表达显著抑制HepG细胞迁移能力（P＜0.05）。转染pGNET1后,HepG2细胞骨架发生重组。结论缺氧促进HepG2细胞骨架重组与Netrin-1表达水平升高相关,Netrin-1表达的上调可能是缺氧促进肝癌细胞骨架重组进而促进侵袭转移的机制之一。