自身失活型慢病毒载体介导的鼠基因工程调节性T细胞的制备和特性研究

摘要

目的制备自身失活型慢病毒载体为基础的鼠基因工程调节性T细胞（Treg细胞）,检测其表型变化,并观察其增殖能力及免疫抑制能力。方法构建含鼠Foxp3基因及内部核糖体进入位点序列（IRES）和绿色荧光蛋白基因（GFP）的双顺反子自身失活型慢病毒载体。采用脂质体转染法将慢病毒载体三质粒转染293T细胞,经共培养法感染免疫磁珠分离的小鼠CD4+CD25-T细胞,流式细胞术（FCM）检测基因转染效率及细胞Foxp3、CD25、GITR、CTLA-4的表达,CCK-8法、ELISA法检测其增殖、免疫抑制能力及细胞因子分泌的变化。结果成功构建了慢病毒表达质粒pXZ208-IRES-GFP、pXZ208-Foxp3-IRES-GFP,包装的重组慢病毒滴度达10~6IU/ml。以pXZ208-IRES-GFP为阴性对照组,共培养法感染CD4+CD25- T细胞,实验组细胞Foxp3、CD25、CTLA-4、GITR表达升高。在抗CD3ε单抗、抗原呈递细胞存在条件下,实验组细胞增殖能力及IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ的分泌均低于阴性对照组（P＜0.01）;且该细胞可显著抑制CD4+CD25-T细胞的增殖。结论成功构建了自身失活型慢病毒载体介导的鼠基因工程Treg细胞;基因工程Treg细胞具有与CD4+CD25+Treg细胞相似的表型及低增殖性和免疫抑制性。