miR-147b-5p对人髓核细胞退变的影响

摘要

目的探讨miR-147b-5p的表达对人髓核细胞(HNPCs)退变的影响。方法采用炎性细胞因子白细胞介素(IL)-1β和肿瘤坏死因子(TNF)-α诱导HNPCs退变,甲苯胺蓝染色观察HNPCs形态及蛋白聚糖的表达,免疫荧光染色观察HNPCs中Ⅱ型胶原蛋白(ColⅡ)表达,实时荧光定量(qRT)-聚合酶链反应(PCR)检测退变髓核细胞中miR-147b-5p的表达。将细胞分为对照组、模型组、miR-147-5p mimic组、miR-147b-5p inhibitor组、mimic-NC组和inhibitor-NC组。噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞活力;流式细胞术检测各组细胞凋亡水平;甲苯胺蓝染色和免疫荧光染色分别观察各组细胞蛋白聚糖和ColⅡ表达;Western印迹检测各组细胞中Notch 4、Hes5、Hey1及Hey2蛋白表达水平。结果成功获得退变髓核细胞,与对照组比较,模型组细胞中蛋白聚糖及ColⅡ表达明显减少,miR-147b-5p表达水平及细胞活力显著降低,凋亡率显著升高(P<0.05)。与模型组比较,miR-147b-5p mimic组细胞活力显著增强,细胞中蛋白聚糖及ColⅡ表达明显增加,凋亡率显著降低,Notch 4、Hes5、Hey1及Hey2蛋白表达均显著降低(均P<0.05),miR-147b-5p inhibitor组各检测指标的变化趋势与各mimic组相反。结论人退变髓核细胞中miR-147b-5p表达降低,增加miR-147b-5p的表达可增强退变髓核细胞的活力,增加蛋白聚糖及ColⅡ表达,抑制细胞凋亡。