RNA干扰沉默CLIC4基因对胃癌细胞增殖和侵袭的影响

摘要

目的探讨氯离子胞内通道(CLIC)4对胃癌细胞增殖和侵袭的影响。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测人胃癌细胞SGC-7901和MGC-803中CLIC4的表达。应用Lipofectamine2000将CLIC4 siRNA转染到SGC-7901细胞和MGC-803细胞中,分为siRNA1组、siRNA2组、siRNA3组、siRNA4组、siRNA5组、模拟组(Mock组)和阴性对照组(CTRL组)。转染后,用RT-PCR技术检测CLIC4 mRNA表达水平,Western印迹检测蛋白表达水平。后续选择CLIC4 siRNA3用于后续的体外试验。使用四甲基偶氮噻蓝(MTT)比色法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。采用聚碳酸酯膜细胞培养插入皿和基质凝胶法检测两种细胞系的入侵和迁移变化。结果CLIC4 siRNA3能显著抑制CLIC4蛋白和mRNA的表达(P<0.05)。转染CLIC4 siRNA3的细胞增殖显著,G2/M期比例增加,G0/G1期和S期比例下降(P<0.05)。CLIC4 siRNA3组细胞凋亡率显著低于Mock组和CTRL组(P<0.05)。CLIC4敲低抑制胃癌细胞的体外迁移和侵袭。但Mock组和CTRL组细胞无显著性差异(P>0.05)。结论高表达的CLIC4可有效抑制胃癌细胞的增殖,促进胃癌细胞的凋亡、迁移和侵袭。