RNA干扰沉默SATB1基因影响前列腺癌细胞增殖和侵袭的实验研究

摘要

目的：利用RNA干扰(RNAi)技术沉默SATB1基因的表达，研究其对人前列腺癌DU145细胞增殖和侵袭的影响，为前列腺癌的基因治疗提供实验基础。
　　 方法：1.SATB1shRNA转录模板DNA链的设计、合成按siRNA设计原则，设计针对SATB1基因cDNA序列的siRNA。再根据siRNA序列设计总长度为63bp的shRNA转录模板DNA正、反义链二条。
　　 2.shRNA表达质粒pSilencer3.1-SATB1的构建将等量的将正、反义二条转录shRNA对应模板的DNA序列，退火处理后克隆至pSilencer3.1。重组质粒命名为pSilencer3.1-SATB1。
　　 3．用LipofectamineTM2000将pSilencer3.1-SATB1转染人前列腺癌DU145细胞，以空质粒pSilencer3.1及未转染的细胞作对照。在转染后24h、48h、72h收集样本，采用RT-PCR检测SATB1mRNA表达、Westernblot检测SATB1蛋白表达、MTT方法检测细胞的增殖，Transwell实验检测细胞的侵袭能力。
　　 结果：1.PCR及测序鉴定表明质粒pSilencer3.1-SATB1构建成功。
　　 2．转染pSilencer3.1-SATB1后24h、48h、72h,DU145细胞SATB1mRNA表达水平（53.0±4.0、49.3±3.1、34.1±4.3）％均显著低于空质粒pSilencer3.1、未转染的细胞（94.0±1.7,100）％；经蛋白印迹检测DU145细胞SATB1蛋白水平为（56.3±3.7、47.0±3.9、31.4±9.0）％均显著低于两对照组（94.0±3.5,100）％;DU145细胞的相对抑制率分别为（53.2±5.8、62.3±4.0、76.7±2.9）％均显著低于两对照组（7.0±1.5、0）％;Transwell侵袭实验结果显示，转染pSilencer3.1-SATB1组侵袭细胞数为34.2±4.2，显著低于两对照组(98.6±8.6、70.3±9.1)。实验证实pSilencer3.1-SATBl比对照组显著抑制DU145细胞SATB1mRNA、SATB1蛋白的表达，抑制细胞的增殖，抑制细胞的侵袭(P＜0.05)。
　　 结论：应用RNA干扰技术沉默SATB1基因可以降低人前列腺癌DU145细胞SATB1的表达，抑制细胞的增殖，同时引起肿瘤细胞侵袭能力的减弱。

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前言

材料与方法

1 材料

2 方法

结果

讨论

结论

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参考文献

SATBI与肿瘤的研究进展　综述

参考文献

攻读硕士学位期间发表的学术论文

临床培训小结

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