人CDK4 cDNA克隆和原核表达

摘要

目的从人肝癌组织细胞中克隆人CDK4基因和原核表达CDK4蛋白.方法用逆转录PCR方法从人肝癌组织RNA中扩增出CDK4 cDNA,然后与T载体和PET28a+载体重组,转化受体菌和诱导表达,DNA序列分析和Western blot鉴定重组质粒和蛋白表达.结果PCR扩增出900 bp的DNA片段,与T载体和PET28a+载体重组得到人CDK4基因的重组质粒,DNA序列显示为人CDK4的cDNA全序列;IPTG可以诱导重组菌表达蛋白;Western blot结果表明为人CDK4蛋白.结论用逆转录PCR方法扩增出人CDK4 cDNA,并与PET28a+载体重组得到能够用IPTG诱导表达的人CDK4蛋白.