人细胞周期蛋白D1及细胞周期蛋白激酶CDK4的原核表达及鉴定

摘要

[目的]构建表达人细胞周期蛋白 D1及细胞周期蛋白激酶 CDK4融合蛋白的重组体.[方法]用 RT- PCR从 HL- 60细胞中扩增细胞周期蛋白 D1及 CDK4基因片段,克隆到 pGEM - T easy载体上.测序鉴定后切下相应的片段,连接到表达载体 pET- 22b(+ )上,重组质粒转化大肠杆菌 BL21(DL3),使之高效表达融合蛋白细胞周期蛋白 D1及 CDK4.SDS- PAGE电泳及 Western blotting鉴定表达蛋白.[结果] 用 PCR扩增得到了正确的目的基因片段并构建成 pET- cyclin D1和 pET- CDK4两个原核表达载体.将其转化大肠杆菌, Western blot检测证实了转化的大肠杆菌能表达细胞周期蛋白 D1及 CDK4融合蛋白.[结论] 本研究成功构建了细胞周期蛋白 D1及 CDK4原核表达载体,后两者在细胞内能正确表达细胞周期蛋白 D1及 CDK4融合蛋白.