荧光报告系统验证 miR－142－5p 的靶基因 Becn1

摘要

目的：验证 miR－142－5p 的靶基因———自噬相关基因 Becn1。方法生物信息学预测 miR－142－5p 与 Becn1的结合位点，构建含有结合位点的 Becn1基因3＇UTR 野生型和突变型质粒，将重组质粒与 miR－142－5p－mimics 或 miR－NC 共转染 C2C12细胞，检测荧光素酶活性。结果miR－142－5p 与 Becn1的3＇UTR存在一个结合位点（123～129）；成功构建野生型重组质粒 pGL3－Becn1－3＇UTR 和靶位点含3个碱基突变的重组质粒 Mut－3＇UTR；与共转染 pGL3－Becn1－3＇UTR 和 miR－NC 组相比，共转染 pGL3－Becn1－3＇UTR 和 miR－142－5p－mimics 组荧光素酶活性显著下降，约为41.2％（ P＜0.01）；而与对照组相比，共转染 Mut－3＇UTR 和 miR－142－5p－mimics 组的荧光素酶活性下降不明显（P＞0.05）。结论初步验证自噬相关基因 Becn1是miR－142－5p 的靶基因。