miR-34 a逆转非小细胞肺癌A549／DDP细胞对顺铂的耐药性及其机制

摘要

目的：探讨过表达miR-34a对非小细胞肺癌A549／DDP细胞顺铂（ DDP）耐药性的影响及可能机制。方法成功构建过表达 miR-34a的真核载体pCDNA3.1＋miR-34a后，将A549／DDP细胞分为对照组（无转染）、空转染组（转染空质粒）和过表达组（转染 pCDNA3.1＋miR-34a），采用实时荧光定量PCR（qPCR）法检测转染24、48、72及96 h后各组miR-34a水平；给予不同浓度DDP（2、4、8、16、32和64μg／ml）处理48 h后采用CCK-8法比较各组对DDP的敏感性，流式细胞仪PI／Annexin V双染法检测各组转染48、96 h后的凋亡率，分别采用 Western印迹检测各组转染48、96 h后常见耐药基因的表达情况。结果 A549／DDP细胞的miR-34a水平均低于其亲本细胞A549和正常支气管上皮细胞系HBE（P＜0.05）；与其余两组相比，过表达组转染后的miR-34a水平升高，且对A549／DDP细胞的增殖抑制率升高（P＜0.05）；过表达组的半数抑制浓度均低于其余两组，过表达组转染48、96 h后的凋亡率高于其余两组，而转染48 h后的P-糖蛋白、多药耐药相关蛋白1及肺耐药相关蛋白的水平低于其余两组（ P＜0.05）；对照组和空转染组以上指标的差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论 A549／DDP细胞中 miR-34a水平较低，通过真核载体将其过表达后可抑制增殖率并提高其对DDP的敏感性，可能与其诱导凋亡及降低耐药基因的表达有关。