晚期糖基化终末产物对内皮细胞衰老及内皮屏障功能的影响

摘要

目的探讨晚期糖基化终末产物（AEGs）对内皮细胞衰老以及内皮屏障功能的影响和作用机制。方法体外分离和培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs）, 随机分为3组, 分别为空白对照组（无干预）、牛血清白蛋白（BSA）对照组（BSA干预72 h）、AGEs组（AGEs干预72 h）, 分别进行β行半乳糖苷酶（SA-β-Gal）染色;实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR）、蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组衰老相关基因p53、p21、p16的表达;2’’, 7’’-二氯荧光黄双乙酸盐法（DCFH-DA）测定细胞内活性氧;细胞电阻计测量各组的跨内皮细胞电阻（TER）;蛋白免疫印迹法检测肌球蛋白轻链激酶（MLCK）、磷酸化肌球蛋白轻链（p-MLC）和肌球蛋白轻链（MLC）的表达。结果与空白对照组（7.81±0.35）%、BSA对照组（7.64±0.91）%相比, AGEs干预HUVECs引起SA-ECs轻链染色阳性率明显增加（67.30±0.75）%（P＆0.01）, 以及衰老相关基因p53、p21、p16的表达量增加（P＆0.05）。空白对照组（48.0±6.3）Ω·cm2与BSA对照组（42.0±7.8）Ω·cm2TER比较差异无统计学意义（P＆0.05）, 而AEGs组TER（27.0±4.2）Ω·cm2降低, 与空白对照组和BSA对照组相比, 差异有统计学意义（P＆0.01）。空白对照组（38.36±8.55）%与BSA对照组（41.67±6.93）%活性氧生成比较差异无统计学意义（P＆0.05）, 而AEGs组（69.31±8.47）%活性氧生成增加（P＆0.05）, 同时AEGs组的MLCK表达与p-MLC/MLC明显增加（P＆0.05）。结论 AGEs通过促进活性氧生成和氧化应激, 以及调节MLCK信号通路影响内皮细胞衰老和内皮屏障功能障碍。